穩轉株即穩定表達細胞株,指基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的
穩轉株構建方法,具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。
穩轉株構建過程中轉染是一個很關鍵的過程,轉染就是在真核細胞里導入具有生物功能的核酸,并在細胞中維持其生物功能。轉染可謂是做生物學實驗的大家經常會考慮的一項實驗技術,大致原理也都明白。實驗室實驗時若qpcr驗證的結果一直不行,可能就是轉染效率太低以至于無法進行后續的實驗。到底轉染是什么呢,為如何選擇轉染方法我們就來一探究竟吧!
穩轉株構建轉染方法的選擇:
我們熟知且常用的轉染方法主要有物理介導、化學介導、生物介導。但實驗室使用較多的主要有化學介導中的脂質體轉染(質粒轉染)和生物介導中的慢病毒轉染法。其中質粒轉染操作簡單,一般瞬時轉染選擇較多,但有些細胞系不容易轉染,因此選擇轉染方式時一定要做足功課。千萬不要圖方便,否則轉染效率簡直崩潰。特別是養原代細胞的小伙伴,一點要認真選擇!
病毒轉染一般具有能夠穩定表達的優勢,且其對原代細胞有較高的轉染效率,其中更分為慢病毒轉染,逆轉錄病毒轉染和腺病毒轉染,其中腺病毒轉染可適合更為難轉染的細胞,例如懸浮細胞、T細胞、raw細胞等難轉染細胞。