重組蛋白需要使用表達系統來對其進行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內方法。兩種方法的前提都是應用基因重組技術，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的蛋白分子。
重組蛋白特性說明：
分為凍干粉和溶液態兩種保存形式，原核細胞表達的為凍干粉狀態，真核細胞表達的蛋白為溶液態保存，這樣使得蛋白非常穩定，在 -80℃ 條件下可保存數年。凍干粉在使用前需進行溶解，其中溶解的方法非常關鍵，因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態保存的蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意，這些都是用戶在實際應用中經常遇到的問題。
1）原核細胞表達的重組蛋白。 大腸桿菌表達的凍干蛋白，已經從包涵體中提純，添加了蛋白保護劑，使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可，復溶凍干蛋白 100g，用 86l 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解，一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
2）真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質不僅要轉錄和翻譯，還要進行翻譯后的加工，使得蛋白質的空間折疊方式維持正常，所以必須在真核細胞中進行，如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內含子，對翻譯后的蛋白質進行加工，這樣表達的蛋白質具有生物活性。用溶液態來保存，保持了其良好的活性和穩定性。
3）重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩定劑有糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。我們通常加 8%（質量比體積）的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質二級結構改變以及凍干過程中蛋白質的伸展和聚集，甘露醇也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。
更新時間：2022-01-04 
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