影響穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株建立的主要因素是什么?

更新時(shí)間：2022-03-01

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　　穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株是指持續(xù)穩(wěn)定地在細(xì)胞中表達(dá)特定基因，或抑制特定基因的表達(dá)。穩(wěn)定細(xì)胞株的目的將基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上，細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)該基因。在基因功能的研究中，基因是否有效轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞是功能研究的前提條件之一。另一方面，穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株彌補(bǔ)了外源基因在一些瞬時(shí)感染(或轉(zhuǎn)染)的功能實(shí)驗(yàn)中表達(dá)時(shí)間短的缺點(diǎn)，便于長(zhǎng)期觀察基因?qū)?xì)胞功能的影響和蛋白之間的相互作用。

　　穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株建立的時(shí)間：

　　需要長(zhǎng)期在目的細(xì)胞中研究基因功能，建立穩(wěn)定的周轉(zhuǎn)細(xì)胞系可以降低頻繁轉(zhuǎn)染和病毒包裝的成本，便于實(shí)驗(yàn)研究

　　部分蛋白質(zhì)半衰期極長(zhǎng)，瞬時(shí)RNA只能干擾表達(dá)，不能清除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白。建立穩(wěn)定細(xì)胞系可以達(dá)到更好的基因干預(yù)效果；

　　瞬轉(zhuǎn)會(huì)引入*拷貝數(shù)的表達(dá)，人為因素導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，建立穩(wěn)定旋轉(zhuǎn)細(xì)胞系有助于篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究

　　需要誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)主要是在需要一些致死基因或時(shí)空表達(dá)的情況下；

　　需要用細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的，如裸鼠腫瘤形成等，往往需要建立穩(wěn)定旋轉(zhuǎn)細(xì)胞系。

　　影響穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株建立的主要因素是什么？

　　整合位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄活性：決定外源基因片段在穩(wěn)定株中的表達(dá)質(zhì)量；

　　外源基因整合率：決定穩(wěn)定株篩選的難易程度；

　　插入外源基因片段的拷貝數(shù)：通常低拷貝或單拷貝可以減少人為干擾；

　　外源基因片段整合到細(xì)胞后的穩(wěn)定性：不同整合位點(diǎn)決定了染色體中外源片段的穩(wěn)定性，部分區(qū)域容易發(fā)生重組和丟失，穩(wěn)定株篩選后出現(xiàn)丟失現(xiàn)象。