pBARGPE1-Kan蛋白表達(dá)質(zhì)粒
啟動(dòng)子gpdA
復(fù)制子pUC
終止子trpC
質(zhì)粒分類其他宿主載體；絲狀真菌表達(dá)質(zhì)粒
原核抗性Kan
真核抗性Bar
克隆菌株DH5α
培養(yǎng)條件37℃
表達(dá)宿主絲狀真菌
培養(yǎng)條件參考相關(guān)文獻(xiàn)
誘導(dǎo)方式無(wú)需誘導(dǎo)
5'測(cè)序引物根據(jù)全序列設(shè)計(jì)
3'測(cè)序引物根據(jù)全序列設(shè)計(jì)
質(zhì)粒宿主絲狀真菌
質(zhì)粒用途蛋白表達(dá)
片段類型基因CDS

注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)化前請(qǐng)準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒相應(yīng)的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl~50μl無(wú)菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來溶解質(zhì)粒，室溫放置1min；

2、從-80℃冰箱中取出相應(yīng)的感受態(tài)，置于冰盒上解凍，并做好標(biāo)記；

3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中，冰浴30min；

4、42℃熱激90s，再冰浴2min；

5、加入900μl無(wú)抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；

6、6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀；

7、混勻后的菌液加至對(duì)應(yīng)抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；

8、將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)12h~16h；

9、挑取單克隆菌落至對(duì)應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12h~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒