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一、載體構(gòu)建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付
二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體;報告基因載體等;
2、基因定點突變,包括單點突變,多點突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建;
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。
| pET28a-NSP7(SARS-CoV-2)蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pET28a-NSP5(SARS-CoV-2)蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pET28a-NSP8(SARS-CoV-2)蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCDH-CMV-HA-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLentiCRISPRV2-NF2(human)-sgRNA2基因編輯質(zhì)粒 |
| pCDH-CMV-FLAG-MCS-EF1a-CopGFP-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLVX-U6-CD274(human)-shRNA1-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒 |
| pLVshRNA-U6-PPARG(mouse)-shRNA1-EF1a-ZsGreen(2A)Puro基因沉默質(zhì)粒 |
| pLVX-HDAC3(human)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒 |
| pLVX-U6-CD274(human)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒 |

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