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一、載體構(gòu)建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備;
(2)目的DNA片段和載體的連接;
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付
二、詳細內(nèi)容
1、以PCR擴增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如大腸桿菌表達載體、酵母表達載體、桿狀病毒表達載體、哺乳動物表達載體;報告基因載體等;
2、基因定點突變,包括單點突變,多點突變,基因缺失等;
3、載體元件替換和改造;
4、siRNA載體和miRNA表達載體構(gòu)建;
5、過表達載體構(gòu)建。
| pEX-N-His-GST-Linker-Neh2-△ETGE(I28P)蛋白表達質(zhì)粒 |
| pEX-N-His-GST-Linker-Neh2-△ETGE(D29E)蛋白表達質(zhì)粒 |
| pEX-N-His-GST-Linker-Neh2-△ETGE(S33R)蛋白表達質(zhì)粒 |
| pEX-N-His-GST-Linker-Neh2-△ETGE(D27E+D29E)蛋白表達質(zhì)粒 |
| pET32a-CUP1-2(yeast)蛋白表達質(zhì)粒 |
| pBC-Hygro-Cbh-MCS蛋白表達質(zhì)粒 |
| pHR_Gal4UAS-HSV TK_IRES_mC_pGK_tBFP蛋白表達質(zhì)粒 |
| pLVX-Puro-Notch(mouse)截短蛋白表達質(zhì)粒 |
| Cbh_v5 AAV-CBE C-terminal基因編輯質(zhì)粒 |

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