p416GPD蛋白表達(dá)質(zhì)粒啟動子GAP復(fù)制子pUC原核抗性Amp真核抗性URA3克隆菌株DH5α培養(yǎng)條件37℃5'測序引物請根據(jù)全序列設(shè)計3'測序引物請根據(jù)全序列設(shè)計質(zhì)粒宿主酵母菌質(zhì)粒用途蛋白表達(dá)片段類型基因CDS片段物種空載體原核抗性氨芐青霉素真核抗性URA3

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一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備；
(2)目的DNA片段和載體的連接；
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
(4)克隆篩選。
(5)測序驗(yàn)證及結(jié)果交付

二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體；報告基因載體等；
2、基因定點(diǎn)突變，包括單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。

pCold-GST-Thrombin Site蛋白表達(dá)質(zhì)粒

pMCSG7蛋白表達(dá)質(zhì)粒

pLKO.1-EGFP-Puro-BCR-ABL-shRNA1基因沉默質(zhì)粒

p416GPD蛋白表達(dá)質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-USP25-shRNA2基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-USP25-shRNA1基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-GPAT3-shRNA2基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-GPAT3-shRNA1基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-CCL7-shRNA2基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-CCL7-shRNA1基因沉默質(zhì)粒

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