活性蛋白試劑適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動(dòng)物組織中提取蛋白。提取過(guò)程可在1小時(shí)內(nèi)完成。試劑含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。活性蛋白*配方能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀、酶活測(cè)定等下游蛋白研究。
活性蛋白的提取試驗(yàn)技術(shù)解讀：
一、細(xì)胞蛋白提取
1.提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2.取5~10·10?個(gè)細(xì)胞，在4℃，100pm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3.用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4.每5·10?個(gè)細(xì)胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5.在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。
6.快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。
7.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
二、組織蛋白提取
1.提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2.取100mg組織樣本剪碎，加入蛋白提取液，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
3.將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃，10000rpm條件下離心5分鐘。
4.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到活性蛋白樣品。
5.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
更新時(shí)間：2021-06-15 
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